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當(dāng)心,使用流動(dòng)相注意這些事了嗎

2020-07-17

流動(dòng)相 | 保質(zhì)期

各位老師知道流動(dòng)相的保質(zhì)期有多久嗎,經(jīng)常遇到有老師前來咨詢“咱們的流動(dòng)相能放多久啊,放一星期沒事吧”。但是老師,您知道嗎,流動(dòng)相放的時(shí)間太長,可是會(huì)直接影響您的實(shí)驗(yàn)結(jié)果呢。在這里就給各位老師說道說道流動(dòng)相的注意事項(xiàng)。

一:流動(dòng)相的貯存

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流動(dòng)相一般貯存于玻璃、聚四氟乙烯或不銹鋼容器內(nèi),不能貯存在塑料容器中。因許多有機(jī)溶劑如甲醇、乙酸等可浸出塑料表面的增塑劑,導(dǎo)致溶劑受污染。這種被污染的溶劑如用于HPLC系統(tǒng),可能造成柱效降低。貯存容器一定要蓋嚴(yán),防止溶劑揮發(fā)引起組成變化,也防止氧和二氧化碳溶入流動(dòng)相。

磷酸鹽、乙酸鹽緩沖液很易長霉,應(yīng)盡量新鮮配制使用,不要貯存。如確需貯存,可在冰箱內(nèi)冷藏,用前應(yīng)重新濾過。容器應(yīng)定期清洗,特別是盛水、緩沖液和混合溶液的瓶子,以除去底部的雜質(zhì)沉淀和可能生長的微生物。

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二:流動(dòng)相放置時(shí)間的影響

01 有機(jī)相揮發(fā):有機(jī)試劑組成比例越大,沸點(diǎn)越低,其揮發(fā)程度越大,不過對于揮發(fā)相對比較好控制,只要密封好就可以;

02 pH值影響:反相色譜流動(dòng)相往往是緩沖鹽,其pH值受有機(jī)相的揮發(fā)、空氣中的二氧化碳等影響,有時(shí)甚至渾濁;且不同pH值及不同緩沖鹽其受影響程度不同;

03 微生物影響:水相體系時(shí)間久了,往往會(huì)致生微生物,特別受光照等影響,因此,往往在棕色瓶中儲(chǔ)存;另外,如果流動(dòng)相中有機(jī)相比例越大,其越不容易致生微生物;所以根據(jù)儲(chǔ)存條件及有機(jī)相比例不同其有效期不同。

所以各位老師要注意了,液相流動(dòng)相建議12小時(shí)以后和瓶子一起更換的,純有機(jī)相建議12小時(shí)抽濾,24小時(shí)以后帶瓶子一起更換。流動(dòng)相溶液更忌微生物超標(biāo),各種菌會(huì)導(dǎo)致柱子堵,而產(chǎn)生很多不良影響。我們都知道,室溫如果高了,純水相上午配的下午下班時(shí)候都有可能會(huì)有微生物繁殖,都需要重新過濾。所以,純水相要現(xiàn)配現(xiàn)用,別抱僥幸心理偷懶不配,結(jié)果誤差大的話,隨時(shí)可能讓你返工哦。

三:流動(dòng)相使用前要用過濾和脫氣

流動(dòng)相使用前用0.45μm濾膜過濾、脫氣,清除微粒和灰塵。在送液泵內(nèi),為了防止雜物(固體)進(jìn)入流路,裝有吸濾器,但網(wǎng)孔徑為10μm,比此更小的顆粒仍然可通過,這會(huì)導(dǎo)致流路和柱子堵塞和污染。為此,建議常用0.45μm濾膜過濾。流動(dòng)相溶劑須經(jīng)脫氣,如不脫氣,在溶劑混合時(shí),或壓力溫度變化時(shí)容易產(chǎn)生大量氣泡,會(huì)導(dǎo)致泵誤動(dòng)作和輸液不暢,檢測器產(chǎn)生噪聲信號等。

四:流動(dòng)相需要恢復(fù)到室溫下使用

流動(dòng)相恢復(fù)到室溫后使用。流動(dòng)相溫度與室溫相差時(shí),流動(dòng)相在恢復(fù)到室溫前,基線水平很難穩(wěn)定,特別是發(fā)生漂移,也容易產(chǎn)生氣泡等現(xiàn)象。水與有機(jī)溶劑混合時(shí),混合液變化大,往往會(huì)與室溫相差很大,務(wù)必注意。

五:避免使用帶有腐蝕性流動(dòng)相流動(dòng)相含有濃硫酸、濃硝酸、二氯乙酸、二氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、二甲亞砜等溶劑,會(huì)對流路中的PEEK樹脂管路強(qiáng)度變差、PEEK樹脂管容易破裂使溶劑外濺。流動(dòng)相含有鹵素離子的溶劑,如KCl、NaCI、NH4CI等。對流路中的不銹鋼材料有腐蝕作用,以上的溶劑須盡量避免使用。非用不可時(shí),分析完了后,應(yīng)立刻用蒸餾水把全流路清洗干凈。

六:在流動(dòng)相中加入有機(jī)試劑后測量pH值

所謂的pH值,是基于水為溶劑的體系才叫pH值,所以正確的調(diào)節(jié)緩沖溶液pH值的做法是在水溶液中進(jìn)行。如果添加了有機(jī)溶劑后再測量pH值,這其實(shí)與添加之前測量的pH值會(huì)有所不同。

然而,更重要的一點(diǎn)是操作習(xí)慣要保持一致。如果習(xí)慣是在添加有機(jī)溶劑之后測量pH值,那只要確保每次的操作都是如此就可以了。雖然這樣操作不是1OO%的準(zhǔn)確,但至少它與之前的做法是一致的。這對于一個(gè)完整的研究來說,相較之你在添加有機(jī)溶劑之前測量pH值而獲得了一次準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)來說,保持一致的操作方法可能會(huì)更重要。

七:不要將流動(dòng)相試劑瓶中的流動(dòng)相完全用光

假如流動(dòng)相準(zhǔn)備的不夠充足,除了存在一定的泵和色譜柱空運(yùn)行的風(fēng)險(xiǎn)外,還會(huì)有其它的問題存在。如由于溶液中水會(huì)從試劑瓶的上方蒸發(fā),所以試劑瓶頂部流動(dòng)相的成分已經(jīng)發(fā)生了改變。如果使用了瓶中更后這部分試劑,事實(shí)上它們就是原來試劑瓶中頂部的那部分,當(dāng)它們通過色譜柱時(shí)可能會(huì)有渣滓滯留在色譜柱中。

八:使用超聲給流動(dòng)相脫氣

超聲法對于確保所用的緩沖鹽完全溶解很有效,但它不是更有效的脫氣方法,而且由于超聲時(shí)溶液會(huì)快速升溫而導(dǎo)致流動(dòng)相中有機(jī)試劑蒸發(fā)。為了節(jié)省時(shí)間,可以花5min時(shí)間通過真空過濾機(jī)來過濾流動(dòng)相,這可以一步達(dá)到脫氣和過濾的兩個(gè)目的。

如果您在流動(dòng)相的貯存或使用方面有其他問題,歡迎聯(lián)系月旭科技銷售人員或撥打400-810-6969服務(wù)熱線,我們將耐心為您服務(wù)。

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