2021-12-16
凝膠過濾介質Tanrose 4FF或Tanrose 6FF是經(jīng)典的病毒類疫苗純化方法,可以去除培養(yǎng)基中的雜蛋白,具有處理量大、快速的特點。柱高一般40-70cm,上樣量一般為10-15%。目前使用此方法生產(chǎn)的疫苗品種有:乙肝、狂犬、出血熱、流感等。
單抗多為IgG,來源主要是腹水和融合瘤培養(yǎng)上清液。腹水有大量白蛋白、轉鐵蛋白和宿主抗體等。Protein G和Protein A對IgG的Fc區(qū)有專一性親和作用,能一步純化各種不同來源的IgG。重組Protein A對IgG有較高的載量和專一性,基團脫落更少。脫落的rProtein A 用離子交換Q Tanrose HP凝膠即可很容易去除。血清互補劑如小牛血清可先用Protein G預處理,在培養(yǎng)前除去IgG。
His標簽重組蛋白可以很方便用鎳瓊脂糖凝膠FF(Ni Tanrose 6FF IDA)或鎳NTA瓊脂糖凝膠FF(Ni Tanrose 6FF NTA)分離,填料已經(jīng)螯合好了鎳離子,使用非常方便,有更高的吸附載量,特異性更強,可以選擇多種洗脫方式,是純化這類融合蛋白的更J工具。
GST融合蛋白可以用GST瓊脂糖凝膠FF(GST Tanrose 4FF)分離,然后再用腸激酶或凝血酶等酶解就得到表達的產(chǎn)物。凝血酶可以用肝素瓊脂糖凝膠FF(Heparin Tanrose 6FF)或苯甲脒瓊脂糖凝膠FF(Benzamidine Tanrose 4FF)分離。
陰離子交換在血漿蛋白的純化中應用非常廣泛,結合低溫乙醇法在丙種球蛋白純化后期用DEAE-瓊脂糖凝膠FF(DEAE Tanrose 6FF)吸附二聚體等雜質從而達到提高產(chǎn)品純度的目的,同樣也可以在白蛋白純化過程中使用陰離子交換吸附PKA、微量的IgG以及聚體,在凝血VIII因子純化過程中使用大孔徑的Q瓊脂糖凝膠(Solid Q)可以增加載量和回收率。
核酸的純化用于去除影響測序或PCR污染物等研究。核酸可大致上分為質粒DNA、噬菌體DNA和PCR產(chǎn)物等。病毒也可視作核酸大分子,和質粒DNA一樣,可用分離大分子的Tanrose 4FF 凝膠過濾介質去除雜蛋白,再配合離子交換 Q瓊脂糖凝膠(Q Tanrose 6FF)分離核酸。也可以用DEAE瓊脂糖凝膠FF(DEAE Tanrose 6FF)或Q瓊脂糖凝膠FF(Q Tanrose 6FF)富集和分離后再上瓊脂糖凝膠6B或6FF得到純的病毒。
核酸帶陰電荷,在初步純化時利用陽離子交換介質如 SP 或CM Tanrose FF 結合目標蛋白,可除去大量核酸。核酸在高鹽下會和蛋白解離,疏水層析介質很適合用來結合目標蛋白,在純化蛋白的同時去除核酸。利用核酸酶將核酸切成小片斷,用凝膠過濾做精細純化時便很容易去除了。
中藥的化學成分極其復雜。傳統(tǒng)中藥多是煎熬后服用,有效成分多較為親水,包括生物堿、黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸、多糖、肽和蛋白質。靈活及綜合性地利用多種層析方法。如離子交換、分子篩、反相層析,更容易分離到單一活性成分。葡聚糖凝膠LH-20(Tandex LH-20)同時具備吸附性層析和分子篩功能,例如:用甲醇分離黃酮甙,三糖甙先被洗下來,二糖甙其次,單糖甙隨后,更后是甙元。葡聚糖凝膠LH-20(Tandex LH-20)可使用水、醇、丙酮、氯仿等各種試劑,廣泛用于各種天然產(chǎn)物的分離,包括生物堿、甙、黃酮、醌類、內(nèi)脂、萜類、甾類等。
生物堿在酸性緩沖液中帶正電,成為鹽,SP陽離子交換層析柱可以分離許多結構非常近似的生物堿。相反,黃酮、蒽醌、皂甙、有機酸等可溶于偏堿的緩沖液中,在Q陰離子交換柱上分離效果良好。
《樣品凈化--脫鹽、小分子去除》
使用凝膠過濾介質Tandex G10、G15、G25等去除小分子,效率高,處理量可達床體積30%。只需在進樣后收集首1/3-1/2柱體積的洗脫液,就可以去除該填料分離范圍上限以下的小分子,簡單直接。由于只是去除小分子,柱高10cm以上即可。整個過程一般可于數(shù)分種至半小時完成。月旭Tandex G25系列介質專為蛋白質脫鹽而設計。
病毒、DNA疫苗或質??梢杂铆傊悄z6B除鹽或交換緩沖液,蛋白、抗體等可以用葡聚糖凝膠G25快速去鹽和交換緩沖液。