在技術(shù)轉(zhuǎn)移過程中，或者說是方法在不同實驗室間重現(xiàn)的時候，通常會遇到分離度變化的問題。分離度如果變大一般情況下就不會在意這個問題了；而如果變小，特別是本身就在限值附近的時候，對我們來說就是一種挑戰(zhàn)。

那么，接下去就的策略就是各種排查。人員操作？流動相？色譜柱？儀器？等等。在經(jīng)過一系列排查之后，發(fā)現(xiàn)問題出在儀器上？Oh！這個問題好難！換個柱子換個人都簡單，可是換儀器？別人家的實驗室我做不了主??！哦！小編也做不了主。但是小編或許能就簡單的儀器問題提供一個簡單的解決方案——如果是因為擴散引起的話！

在開始今天的話題之前，我們有必要先看看分離度的公式。放寬心，今天不涉及到計算。（理論基礎(chǔ)是有必要的，因為我們目前的大部分研究都是基于前人的基礎(chǔ)理論研究。）

上述給出了兩個分離度公式，從公式可以看出，無論是基于半峰寬W50的分離度計算，還是基于tangent的峰寬Wt的計算，當峰寬/半峰寬增加的時候，分離度Rs都是減少的。

當我們的組分從進樣器經(jīng)過一定的管路到達柱子中，再經(jīng)過柱子后通常又經(jīng)過了一小段的管路，更后到達流通池中被檢測到。在這個過程當中，組分因為分子間的運動發(fā)生擴散，從而具有一定的峰寬。見示意圖：

由上述示意圖可以很明顯的看到，組分擴散的越厲害，譜帶展寬越大，峰寬越寬。

再回到我們的分離度公式，前文說過，峰寬越寬，分離度越小——這就是擴散帶來的對分離度的影響。

那么，怎么解決這個問題呢？

將原有內(nèi)徑較大的管路換成內(nèi)徑更小的管路；將原有較長的管線換成更短的管線。

用核殼柱替換原有的全多孔柱，由于核殼柱顆粒均勻度較高，加之較短的擴散路徑，峰寬就越窄，柱效往往更高。

將標準流通池換成半微量流通池或者是微量流通池——這一項更改相對上述兩項會麻煩一些，因為還需要考慮前面管線的影響，不能簡單把流通池換了就萬事大吉了。

講到這里，擴散的問題就講完了。而關(guān)于上述現(xiàn)象及處理方法其實都是基于色譜基礎(chǔ)理論——速率理論，速率理論不止適用于LC,也適用于GC。當然，要用單一的模型解決所有問題也是不現(xiàn)實的。不過對于我們今天的擴散問題，速率理論已經(jīng)能很好的解決了。

另外，講到這里需要額外說一點關(guān)于儀器及柱子的問題。液相色譜發(fā)展的時間已經(jīng)不短了。那么，針對今天擴散的話題，在你使用時間較久的儀器或柱子的時候，特別是用快速柱（3.5/3.0μm或以下粒徑的色譜柱）時，很有可能就會碰到譜帶展寬而造成的分離度降低的問題，因為早先的儀器Dwell體積是比較大的；而當你使用更新款的UPLC/UHPLC時，也別沾沾自喜，隨手一拿就是250mm/5μm的柱子，這也可謂有些暴殄天物。老板給了你一臺邁巴赫，你把它開成了電動三輪。小編一直說，合適的才是更好的，對于較長的柱子，也許您家的“老爺機”也能有優(yōu)異的表現(xiàn)，且不輸于你的UPLC/UHPLC;而當您使用UPLC/UHPLC時，請給它相應的更小的色譜柱，如此才能發(fā)揮出它更大的優(yōu)勢。不說儀器廠商投入多少研發(fā)成本才有了現(xiàn)在的低Dwell體積的儀器，想想你家老板可是真金白銀才換來的新款儀器，別讓它成為擺設(shè)啦！理解，并且更大程度的發(fā)揮出優(yōu)勢，才是更高效更合理的。而我們，就是發(fā)揮這種作用的紐帶！共勉！