2022-03-28
在方法開發(fā)工作中,經(jīng)常會碰到驗證時方法無法重現(xiàn)的情況,而這種時候,很多人會把這個“錯”歸到色譜柱上。確實,有ji少數(shù)的“超敏體質(zhì)”項目,會對色譜柱的內(nèi)環(huán)境ji度敏感導(dǎo)致無法重現(xiàn)。但大部分無法重現(xiàn)卻是其他原因造成的,今天,我們就來說一說這些其他原因。
使用期間的色譜柱變化,俗稱色譜柱改性
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這種問題經(jīng)常出現(xiàn)在使用檢測過其他項目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā),再換色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)時發(fā)生。這種情況是因為,有些特殊物質(zhì)(可能是樣品中的微量雜質(zhì)或強(qiáng)保留物質(zhì))會吸附在填料上無法洗脫下來,這種情況就會對色譜柱造成改性。在檢某些特定成分時,會影響成份的保留能力,導(dǎo)致更換色譜柱后無法重現(xiàn)分離效果。避免這種情況更好的辦法就是方法確定后馬上用新色譜柱進(jìn)行結(jié)果重現(xiàn)。如新柱無法重現(xiàn)結(jié)果,就有很大的可能是舊柱子被改性引起的。
2 有時,使用沒有測過其他項目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā),后面重現(xiàn)的時候,也會發(fā)生更換柱子無法重現(xiàn)的情況。這是因為,方法開發(fā)過程中會使用到很多的不同條件及不同前處理方法處理的樣品,這種情況,也可能使色譜柱改性。因此,哪怕是用沒做過其他項目的色譜柱進(jìn)行方法開發(fā)的,方法確定后,也需用全新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。 3 色譜柱使用ji限條件(如高pH值,高溫,低pH值等),導(dǎo)致色譜柱受損,在這種色譜柱上開發(fā)的方法,在更換新柱時,也經(jīng)常會出現(xiàn)無法重現(xiàn)的情況。高pH值會引起硅膠溶解,色譜柱塌陷;低pH值會導(dǎo)致鍵合相容易脫落,高溫會導(dǎo)致填料塌陷,板結(jié)等情況,使色譜柱的保留能力發(fā)生變化。因此,使用這種條件的方法,方法確定后,一定要用新的色譜柱進(jìn)行重現(xiàn)。 4 色譜柱使用過含離子對試劑的條件,離子對試劑會使色譜柱改性,無法完全沖洗干凈,因此,使用過離子對試劑的色譜柱建議專柱專用。 具體的原因,我們將在下篇繼續(xù)為您解答!未完待續(xù)~