2022-06-16
嘔吐毒素(vomitoxin),又稱脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON),化學(xué)名為3α, 7α, 15一三羥基草鐮孢菌-9-烯-8-酮,屬于單端孢霉烯族化合物,主要由禾谷鐮刀菌、尖孢鐮刀菌、串珠鐮刀菌、擬枝孢鐮刀菌、粉紅鐮刀菌、雪腐鐮刀菌等鐮刀菌產(chǎn)生。另外,頭孢菌屬、漆班菌屬、木霉屬等的菌株都可產(chǎn)生該毒素。單端孢霉烯族毒素共有150多種,是一類強有力免疫抑制劑,所引起典型癥狀是采食量降低,所以這類毒素又叫飼料拒食毒素。嘔吐毒素是其中更重要一種毒素,主要來自鐮刀菌屬,尤其是禾谷鐮刀菌和黃色鐮刀菌由于它可以引起豬的嘔吐,故又名嘔吐毒素。
嘔吐毒素被列為3類致癌物。它們具有很高的細胞毒素及免疫抑制性質(zhì),因此,對人類及動物的健康構(gòu)成了威脅,特別是對免疫功能具有明顯的影響。DON廣泛存在于全球,主要污染小麥、大麥、玉米等谷類作物,也污染糧食制品,當(dāng)人攝入了被DON污染的食物后,會導(dǎo)致厭食、嘔吐、腹瀉、發(fā)燒、站立不穩(wěn)、反應(yīng)遲鈍等急性中毒癥狀,嚴(yán)重時損害造血系統(tǒng)造成死亡。由于中國傳統(tǒng)飲食習(xí)慣中糧谷比例大大高于西方,使得嘔吐毒素的危害更為突出。谷物及飼料中DON的含量有嚴(yán)格的限量標(biāo)準(zhǔn)。我國谷物中DON的限量標(biāo)準(zhǔn)為1.0 mg/kg。
我國用于檢測嘔吐毒素的液相色譜法,常常會利用嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇)免疫親和柱,免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的脫氧雪腐鐮刀菌烯醇,從而對脫氧雪腐鐮刀菌烯醇起到非常針對性的純化作用。
利用抗原抗體反應(yīng),抗體連接在柱體內(nèi),樣品經(jīng)過提取、過濾后,緩慢的通過脫氧雪腐鐮刀菌烯酵免疫親和層析柱,在免疫親和柱內(nèi)毒素與抗體結(jié)合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他無關(guān)物質(zhì),再用甲醇洗脫,然后用于檢測。過凈化柱后可直接用于液相脫氧雪腐鐮刀菌烯醇含量的檢測,可提高檢測方法的準(zhǔn)確度,達到快速測定的目的。
參考標(biāo)準(zhǔn)《GB 5009.111-2016 食品安全guo家標(biāo)準(zhǔn) 食品中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇及其乙?;苌锏臏y定》 ,月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱完成符合標(biāo)準(zhǔn)要求。以面粉為樣品,采用月旭嘔吐毒素(脫氧雪腐鐮刀菌烯醇) DON免疫親和柱凈化,然后進行檢測。
凈化步驟
回溫:將免疫親和柱從低溫條件下取出后,恢復(fù)至室溫,將柱內(nèi)液體放出;
上樣:待凈化液全部上樣,棄去;
淋洗:5mL磷酸鹽緩沖液,5mL水,棄去,抽干柱子;
洗脫:加入2mL甲醇洗脫,抽干柱子;
濃縮:將洗脫液置于 50℃水浴中氮吹至干,用20%甲醇水定容至1mL,用0.22μm濾膜過濾,上機測定。
色譜條件
色譜柱:月旭Ultimate? XB-C18 4.6×150mm,5μm;
流動相:水:甲醇(80:20);
流速:1.0mL/min;
柱溫:30℃;
進樣量:20μL;
波長:218nm 。
回收率結(jié)果如下圖:
圖一:面粉樣品空白圖譜
圖二:面粉樣品加標(biāo)2.0mg/Kg圖譜
圖三:嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品1mg/L圖譜
相關(guān)產(chǎn)品信息