2022-06-20
乳清蛋白是采用先進工藝從牛奶中分離提取出來的珍貴蛋白質,以其具有高生物價、高消化率、高蛋白質功效比和高利用率等優(yōu)點,被譽為“蛋白之wang”,是公認的人體優(yōu)質蛋白質補充劑之一。其含量的高低決定了嬰幼兒奶粉的品質,相關國標通過酸水解以后的氨基酸來評價乳清蛋白的含量,月旭科技推出的檢測方法檢測更加快捷可靠。
樣品前處理
稱取0.1g試樣(含蛋白質7.5mg-25mg的樣品),于水解管中,在冰水浴中冷卻 30min后加入2mL已經冷卻的過甲酸溶液,蓋好瓶塞后置于0℃±1℃冰箱中,冰浴16h。向各水解管中加入0.3mL氫溴酸,振搖后冰浴 30min,在60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干。向水解管內加入6moL/L鹽酸10mL,沖入氮氣1min 后,擰緊螺絲蓋,將水解管放在110℃±1℃的恒溫干燥箱內水解24h后取出冷卻至室溫。將水解液用超純水轉移并定容至25mL容量瓶中,混勻,濾紙過濾。吸取濾液1mL于60℃±2℃氮吹儀上濃縮至干,殘留物用1mL超純水溶解,待衍生。
標準品溶液
用超純水配置磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標準品溶液1μmoL/mL,待衍生。
衍生方法
分別將月旭科技氨基酸衍生方法包中 A、B兩種衍生試劑用稀釋劑稀釋至原來濃度的 1/5;精密量取混標溶液及樣品溶液各160μL,加入稀釋后的衍生溶液 A、B 各100μL,混勻,室溫反應60min;然后加入正己烷溶液 400μL,旋緊蓋子后振搖10s,室溫靜置分層,取下層液200μL,加入800μL水中,混勻;再移取200μL加入到800μL水中,混勻,用0.45μm 有機濾膜過濾,即得。
色譜條件
色譜柱:月旭Ultimate? AQ-C18(4.6×250mm,3μm)。
柱溫:40℃;
紫外檢測器:254nm;
流速:1.0mL/min;
進樣量:5μL。
譜圖和數(shù)據(jù)
1. 磺基丙氨酸、天冬氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸標準品溶液1μmoL/mL。
2. 樣品水解
結論
用月旭Ultimate? AQ-C18(4.6×250mm,3μm)色譜柱,在該色譜條件下測定,能滿足實驗需求。