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體積排阻色譜知多少?

2022-06-27

體積排阻色譜( size-exclusion chromatography,SEC)是快速分離不同分子量混合物的色譜方法,可以快速的確定樣品混合物的復雜性,而且可以同時給出各個組分的大概分子量及分布。

分離原理:分子的體積排阻,樣品組分和固定相之間原則上不存在相互作用,色譜柱的固定相是具有不同孔徑的多孔凝膠,只讓臨界直徑小于凝膠孔開度的分子進入(保留),其孔徑大于溶劑分子,所以溶劑分子可以自由地出入。高聚物分子在溶液中呈無規(guī)則線團,線團的體積和分子量有一定的線性關系,對不同大小的溶質分子可以滲透到不同大小的凝膠孔內不同的深度,小的溶質分子,大孔小孔都可以進去,甚至可以滲透到很深的孔中。因此小的溶質分子保留時間長,洗脫體積大,而大的溶質分子保留時間短,洗脫體積小。

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GPC色譜柱選擇

按照樣品所溶解的溶劑來選擇柱子所屬系列:

THF,DMF,三氯甲烷。

按照樣品分子量范圍來選擇色譜柱:

樣品分子量應處在排阻極限和滲透極限的范圍內,并且更好是處在校正曲線線性范圍內。

SEC中流動相僅起到在柱子中

運輸溶質的作用

流動相選擇:

能完全溶解樣品,但不與試樣反應,不與填料有任何相互作用,黏度低,沸點比柱溫高20-50℃。

典型的流動相:

100mmol磷酸鉀和氯化鉀溶液。

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