2022-09-22
Hello小伙伴大家好,想必大家實(shí)驗(yàn)室都有蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)吧,對(duì)于脂類(lèi)、糖類(lèi)、氨基酸、聚合物等無(wú)紫外響應(yīng)的待測(cè)物我們還是得選擇通用型檢測(cè)器,今天小編匯總了一篇ELSD干貨,助力你的進(jìn)階之路,記得收藏&分享噢。
ELSD的工作原理 ELSD的檢測(cè)原理分三步,三、二、一,走起: 1、霧化過(guò)程 用惰性氣體或凈化空氣將色譜柱流出物霧化,流動(dòng)相和氣體混合噴成均勻的霧滴。 2、蒸發(fā)過(guò)程 在漂移管中將流動(dòng)相揮發(fā),霧滴經(jīng)過(guò)加熱的漂移管,流動(dòng)相被蒸發(fā),溶質(zhì)形成極細(xì)的顆粒。 3、檢測(cè)過(guò)程 測(cè)定留下來(lái)的樣品顆粒的光散射,溶質(zhì)顆粒氣流在檢測(cè)池被光束照射,其散射光被光電二極管轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)輸出。 ELSD檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)及缺點(diǎn) ELSD可作為高效液相色譜、高速逆流色譜、超臨界流體色譜等色譜的檢測(cè)器。作為新型的通用型檢測(cè)器,它具有許多優(yōu)點(diǎn):首先,ELSD檢測(cè)不依賴于樣品的光學(xué)性質(zhì),只要揮發(fā)性小于流動(dòng)相的物質(zhì),都可以在ELSD上產(chǎn)生響應(yīng)。其次,ELSD可以很好的支持梯度洗脫,蒸發(fā)光散射檢測(cè)可以消除流動(dòng)相配比變化對(duì)基線產(chǎn)生的影響。另外,輔助載氣提高了檢測(cè)靈敏度,保持檢測(cè)池內(nèi)的清潔,避免污染。 但是,相對(duì)于UV檢測(cè)器,ELSD檢測(cè)也有一定的特殊性。ELSD檢測(cè)要求流動(dòng)相及流動(dòng)相中加入的修飾劑必須有良好的揮發(fā)性,這樣就使非揮發(fā)性的緩沖鹽的應(yīng)用受到了限制。與UV檢測(cè)器相比,ELSD檢測(cè)的靈敏度略低。 影響ELSD檢測(cè)性能的基本因素 操作條件的選擇,選擇合適的操作條件可提高方法的靈敏度,操作條件的選擇取決于樣品的揮發(fā)性、流動(dòng)相的組成及其流速。 流動(dòng)相組成及流速的選擇,流動(dòng)相的揮發(fā)性越好,方法的靈敏度越高。流動(dòng)相的流速越低,相應(yīng)的信號(hào)越強(qiáng)。漂移管溫度對(duì)基線水平和噪音的影響并無(wú)明顯的規(guī)律性。更優(yōu)溫度應(yīng)為在流動(dòng)相基本揮發(fā)的基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的更低溫度。載氣流速是影響檢測(cè)性能的一個(gè)很重要的因素。更優(yōu)載氣流速應(yīng)是在可接受噪音的基礎(chǔ)上,產(chǎn)生更大檢測(cè)響應(yīng)值時(shí)的更低流速。 ELSD使用中常見(jiàn)問(wèn)題 01、改變漂移管溫度后儀器的響應(yīng)不一樣 溫度太低,基線水平較高,流動(dòng)相得不到充分揮發(fā);溫度太高,會(huì)使流動(dòng)相沸騰,反而增加背景噪聲,同時(shí)還有可能導(dǎo)致被測(cè)樣品的部分揮發(fā),降低信噪比。更優(yōu)的溫度應(yīng)為流動(dòng)相基本揮發(fā)基礎(chǔ)上,產(chǎn)生可接受噪音的更低溫度。 ELSD5450屬于低溫性蒸發(fā)光散射檢測(cè)器,可以用低于溶劑沸點(diǎn)的溫度揮發(fā)溶劑。例如:純水的沸點(diǎn)為100度,調(diào)節(jié)揮發(fā)溫度為40度就可以達(dá)到水完全揮發(fā)的效果,如果是甲醇,溫度35度就可達(dá)到。所以日常實(shí)驗(yàn)中的梯度流動(dòng)相,多種溶劑混合后的沸點(diǎn)是低于100度的,我們把溫度設(shè)置在40度就可以了。不是說(shuō)溫度設(shè)置在60度80度就不可以,而是40度是它更佳的一個(gè)揮發(fā)溫度,揮發(fā)溫度越低樣品形成的顆粒越大,ELSD的響應(yīng)值就越高。 02、改變載氣流速后儀器的響應(yīng)不一樣 其它條件不變的情況下,載氣流速越小,形成的物質(zhì)粒子半徑越大,對(duì)光的散射能力越強(qiáng),相應(yīng)的響應(yīng)信號(hào)越大,更優(yōu)的載氣流速應(yīng)為可接受噪音基礎(chǔ)上并且產(chǎn)生較高響應(yīng)的更低流速。 03、儀器一直顯示未就緒狀態(tài) 不同溶劑的揮發(fā)性不同,儀器較長(zhǎng)時(shí)間保存在易揮發(fā)的溶劑中,由于溶劑的揮發(fā)而導(dǎo)致液相的脫氣機(jī)真空不夠而儀器一直顯示未就緒狀態(tài)。遇到這種情況后要先更換揮發(fā)性較低的溶劑(如異丙醇)對(duì)儀器的每個(gè)管路分別Purge 10分鐘以上,然后儀器的噪音會(huì)逐漸降低,軟件也會(huì)由未就緒變成空閑狀態(tài)。然后就可以更換需要的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。 04、儀器的基線很亂,無(wú)規(guī)律狀態(tài),噪聲范圍很大 這種情況多半是漂移管污染了,需要對(duì)漂移管進(jìn)行清洗。按照儀器說(shuō)明書(shū)的操作用適合的工具拆開(kāi)儀器,用專(zhuān)用的清理刷使用乙醇和清水進(jìn)行清洗。如果使用氨基柱,并將氨基柱用于反相,在水的作用下,氨基會(huì)流失,噪聲就會(huì)比較大,可以通過(guò)提高有機(jī)相比例或更換其他種類(lèi)的色譜柱來(lái)解決。 05、不出峰或峰太小 ● 溫度設(shè)置過(guò)低,流動(dòng)相霧化不充分造成。 ● 溫度設(shè)置過(guò)高,待測(cè)組分揮發(fā)。 ● 漂移管臟,造成低噪音。 ● 廢液管沒(méi)入廢液瓶中,廢氣管內(nèi)有液體,廢液管必須在液面以上,在虹吸管形成液封。 ● 排氣不暢,或外界抽氣壓力過(guò)大。 06、序列太長(zhǎng)時(shí),同一樣品在序列前后的峰面積差異較大 遇到這種情況就要考慮同一序列中需要排的樣品數(shù)了。分析原因,可能是流動(dòng)相組成中不同成分的揮發(fā)性不一致,導(dǎo)致運(yùn)行到后面的流動(dòng)相中不同組分的比例發(fā)生變化,出峰情況也就不一樣了;還有可能在運(yùn)行的過(guò)程中樣品顆粒有少量殘留在儀器中沒(méi)有排出而導(dǎo)致后面的樣品面積增大。使用ELSD檢測(cè)時(shí),可減少同一序列的樣品數(shù)量,檢測(cè)的數(shù)量少了,相對(duì)儀器的負(fù)擔(dān)也會(huì)減少,維護(hù)起來(lái)也方便。 07、前處理引入污染 由于選擇ELSD作為檢測(cè)器是用于常量或痕量分析,多數(shù)時(shí)需要對(duì)樣品或預(yù)處理中的萃取液進(jìn)行濃縮,這時(shí)需要考慮溶液中痕量干擾物,如塑料制品中的增塑劑,在多數(shù)萃取時(shí)使用氯仿類(lèi)萃取液時(shí),會(huì)溶解增塑劑,如果直接上色譜分析,ELSD不會(huì)明顯顯現(xiàn),一旦進(jìn)行濃縮后,增塑劑濃度變得很大,可以被ELSD檢出。 08、結(jié)果計(jì)算 在ELSD的方法中通常應(yīng)用對(duì)數(shù)相關(guān)的方式進(jìn)行線性回歸,因?yàn)樵贓LSD的檢測(cè)過(guò)程中隨著濃度的增加,信號(hào)響應(yīng)的方差可能會(huì)隨之增大,為了使方差恒定,可以采用濃度和峰面積取對(duì)數(shù)后的線性回歸,并且在實(shí)際供試品含量計(jì)算時(shí)需要帶入線性方程進(jìn)行計(jì)算,在ELSD的方法中不宜采用單點(diǎn)外標(biāo),至少采用兩點(diǎn)的曲線法進(jìn)行定量計(jì)算。 出現(xiàn)問(wèn)題時(shí)應(yīng)逐一排查流動(dòng)相(水/甲醇/乙腈/酸等),氣源,色譜柱,儀器管路。 關(guān)于儀器故障排查以及維護(hù)操作我們下次再分享,關(guān)注月旭科技,分享知識(shí),助力你的進(jìn)階之路,下一個(gè)實(shí)驗(yàn)室主任就是你了!